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Technical article取到新鲜组织，RNA却在一瞬间降解——这大概是分子生物学实验中最让人无力的瞬间。液氮罐还没拎到，RNA酶已经开始“工作”了；-80℃冰箱远在实验室，野外采样根本没法操作；普通冰箱放一晚，第二天提取出来的RNA质量早已惨不忍睹。液氮速冻固然可靠，但设备限制和操作门槛让很多场景根本没法实现。那有没有一种方法，能让组织里的RNA在常温下也“稳如泰山”？
本文系统拆解新鲜组织RNA保存液的核心作用原理、经典配方设计逻辑、标准配制流程及使用要点，帮你彻底告别“追着液氮跑”的焦虑。
新鲜组织RNA保存液是一种水相、无毒的组织储存液体，核心任务就四个字：抑、渗、稳、护——抑制RNase活性、渗入组织内部、稳定RNA分子结构、保护核酸不被降解。将新鲜组织切块后直接浸入保存液中，试剂会迅速渗透到组织内部，在非冻状态下原位“定格”RNA状态。
整个流程从“取样→液氮速冻→-80℃转运”简化为“取样→浸泡保存液→任意温度运输”，彻底摆脱对液氮的依赖。
市面上RNA保存液的配方虽各有差异，但核心功能模块基本一致。以下为经典配方（硫酸铵-柠檬酸钠体系）的组分拆解：
| 成分类别 | 常用原料 | 核心作用 | 参考浓度 |
|---|---|---|---|
| 离液盐/蛋白变性剂 | 硫酸铵 | 高浓度盐破坏蛋白水化层，使RNase变性失活 | 400~500 g/L（约3~4 M） |
| 螯合剂 | EDTA二钠盐 | 螯合Mg²⁺、Zn²⁺等RNase必需的金属辅因子，使其“巧妇难为无米之炊” | 15~25 mM（约7.4 g/L） |
| 缓冲/保护剂 | 柠檬酸三钠 | 维持酸性pH环境（RNase在酸性条件下活性极低）；柠檬酸根辅助螯合金属离子 | 15~25 mM（约7.4 g/L） |
| 还原剂（可选） | DTT | 打断蛋白二硫键，辅助RNase彻底失活 | 10~20 mM |
| 溶剂 | 无酶无菌水/DEPC处理水 | 作为载体，保证各组分均匀分散 | 余量 |
| 原料 | 用量 | 备注 |
|---|---|---|
| EDTA二钠盐（Na₂EDTA·2H₂O） | 约7.4 g | 终浓度20 mM |
| 柠檬酸三钠二水合物 | 约7.4 g | 终浓度25 mM |
| 硫酸铵 | 400~500 g | 终浓度约3~4 M |
| 无酶无菌水 | 定容至1 L | DEPC处理水或商品化无酶水 |
| 1 M柠檬酸溶液 | 适量 | 用于调节pH |
第一步：配制EDTA溶液
称取约7.4 g EDTA二钠盐，溶于200 mL无酶水中。EDTA在碱性条件下更易溶解，可用NaOH调节pH至8.0帮助溶解。
第二步：配制柠檬酸钠溶液
称取约7.4 g柠檬酸三钠二水合物，溶于50 mL无酶水中，搅拌至完全溶解。
第三步：混合与加盐
将上述两种溶液混合后，加入400~500 g硫酸铵粉末。置于磁力搅拌器上室温长时间搅拌（建议过夜）至硫酸铵完全溶解。若需加速，可低热加热至不超过37℃，但溶解后必须完全冷却至室温后再进行下一步。
第四步：定容与调pH
加无酶无菌水定容至1 L。冷却至室温后，用1 M柠檬酸溶液缓慢调节pH至5.2。柠檬酸为弱酸，滴定曲线平缓不易过调，且柠檬酸根本身具有辅助螯合作用。
第五步：过滤除菌与分装
用0.45 μm或0.22 μm滤膜过滤除菌（推荐PES或PVDF材质滤膜），分装至无菌离心管中，室温或4℃保存。
| 要点 | 说明 |
|---|---|
| 硫酸铵溶解 | 400~500 g/L属高浓度，需耐心搅拌（室温下可能需数小时甚至过夜），完全溶解后方可进行下一步 |
| 无RNase环境 | 所有器具和溶剂必须无核酸酶（使用DEPC处理水或商品化无酶水） |
| pH精确控制 | pH必须精准控制在5.2左右——过高则RNase抑制效果大打折扣，过低可能损伤组织 |
| 操作环境 | 配制全程在洁净区操作，称量硫酸铵时佩戴口罩防粉尘吸入，佩戴护目镜和耐酸碱手套 |
| 有效期 | 配制好的保存液可在4℃稳定保存6个月以上 |
| 要点 | 说明 |
|---|---|
| 组织大小 | 组织需切成0.5~1 cm³的小块，确保保存液充分渗透 |
| 用量比例 | 保存液用量至少为组织体积的8~10倍 |
| 保存温度与时间 | 室温可保存7天，4℃可保存4周，-20℃或-80℃可长期保存 |
| 保存方式 | 优点 | 缺点 |
|---|---|---|
| 液氮速冻 | RNA保存效果最佳 | 需专用容器和防护，野外无法操作 |
| -80℃冰箱 | 可长期保存 | 依赖设备，运输途中无法保障 |
| 普通冰箱（4℃/-20℃） | 操作简便 | RNA快速降解，第二天即明显损失 |
| RNA保存液 | 无需液氮，室温稳定，操作简便 | 需提前准备保存液 |
自行配制RNA保存液涉及高浓度硫酸铵的充分溶解、无RNase环境的严格把控、pH的精确调节——每一步都影响最终的保护效果，且批次间稳定性难以保证。
杭州富沃克生物科技有限公司推出的科研专用新鲜组织RNA保存剂，采用专业缓冲防护配方，可强效抑制核酸酶活性，有效延缓RNA降解，稳固维持核酸完整结构。产品能迅速渗透新鲜组织细胞内部，在非冻状态下原位稳定和保护细胞内的RNA。
经保护的RNA在室温可保存7天，4℃可保存4周，-20℃或-80℃可长期保存。适配动物组织（肝、脑、心、肾、肌肉等）、培养细胞、细菌、真菌等多种样本类型。喷雾/浸泡双模式设计，操作简单，省去自行配制的繁琐与风险。
| 产品名称 | 规格 | 产品货号 |
|---|---|---|
| 新鲜组织RNA保存剂 | 1 mL / 50 mL | ZZB606-01 |
邮箱：support@fwkbio.com
厂家联系微信号：19850855600
参考文献
[1] Camacho-Sanchez M, Burraco P, Gomez-Mestre I, et al. Preservation of RNA and DNA from mammal samples under field conditions[J]. Molecular Ecology Resources, 2013, 13:663-673.
[2] 温州医科大学附属第一医院. 一种动物组织RNA的样品保存液及其保存方法: CN109609498A[P]. 2019-04-12.
[3] 中国医科大学（吕昌龙, 翟景波, 高植鹏, 王大南, 姜雪峰）. 一种生物组织RNA保护试剂及其制备方法和应用: CN104673717A[P]. 2015-06-03.
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