磷酸盐缓冲液核心储备液配制攻略｜1M磷酸氢二钠三种形态称量对照与PBS pH调节表

发布日期： 2026-07-18

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磷酸盐缓冲液核心储备液配制攻略｜1M磷酸氢二钠三种形态称量对照与PBS pH调节表

蛋白纯化时缓冲液pH死活调不到目标值、细胞培养基偏酸偏碱细胞养不活、色谱峰形歪歪扭扭——这些生物实验中反复出现的“老大难”，排查到最后往往发现：磷酸氢二钠本身就没配对。

磷酸氢二钠是磷酸盐缓冲液（PBS）最核心的储备液之一——细胞培养、蛋白纯化、核酸电泳、免疫检测，处处都有它的身影。但很多人不知道的是，磷酸氢二钠有无水、二水、十二水三种常见形态，分子量各不相同——用错了形态，浓度直接报废。

本文将系统梳理磷酸氢二钠的三种水合物形态区分、1M贮液配制方法、以及用于PBS缓冲液配制的混合比例表。

一、认识磷酸氢二钠：三种形态与分子量速查

磷酸氢二钠（Disodium Hydrogen Phosphate），化学式Na₂HPO₄，易溶于水，水溶液呈弱碱性。实验室最常见的三种形态及核心参数如下：

形态	化学式	分子量	CAS号	特征
无水磷酸氢二钠	Na₂HPO₄	141.96 g/mol	7558-79-4	最常用形态
二水合磷酸氢二钠	Na₂HPO₄·2H₂O	177.99 g/mol	10028-24-7	含2个结晶水
十二水合磷酸氢二钠	Na₂HPO₄·12H₂O	358.14 g/mol	10039-32-4	含12个结晶水

⚠️ 核心警示：三种形态分子量差异巨大——无水物142、二水合物178、十二水合物358。配制1M溶液时称量各不相同，不可混用。购买时务必看清试剂标签上的形态说明！

补充说明：磷酸氢二钠在空气中易风化（失去结晶水），长期存放的试剂形态可能发生变化，称量前应确认试剂状态。如发现结块或外观异常，建议干燥后使用或更换新试剂。

二、1M磷酸氢二钠贮液配制方法

配制参数速查（1 L）

所用原料形态	分子量	配制1L 1M溶液的称量	备注
无水物	141.96	142 g	推荐使用，计算简便
二水合物	177.99	约178 g	—
十二水合物	358.14	约358 g	—

分步操作流程

步骤	操作	关键说明
①	确认试剂形态：检查试剂瓶标签，确认是无水物、二水合物还是十二水合物	这一步错了，后面全错
②	按上表称取对应质量的磷酸氢二钠	使用分析天平，精确至0.1g即可
③	加入约800 mL去离子水（或蒸馏水），搅拌至完全溶解	—
④	加去离子水定容至1 L，充分混匀	建议在室温（20-25℃）下定容——高浓度盐溶液在高温下定容后冷却会导致体积收缩，实际浓度偏高
⑤	转移至试剂瓶，室温保存	—

如需要无菌溶液

过滤除菌：使用0.22 μm滤膜过滤（推荐，不影响浓度和pH）
高压灭菌：121℃灭菌15-20分钟，但灭菌后需重新校准pH（高温可能引起pH漂移）

三、用于配制磷酸盐缓冲液（PB）的实战应用

磷酸盐缓冲液通常由磷酸二氢钠（酸性）和磷酸氢二钠（碱性）两种贮液混合配制。以下是标准配制方案：

第一步：配制两种1M贮液

贮液	原料	称量（定容至1L）
1M磷酸二氢钠	NaH₂PO₄·H₂O	138 g
1M磷酸氢二钠	Na₂HPO₄（无水）	142 g

第二步：按比例混合，稀释至工作浓度

以下为1M贮液混合比例表（混合后稀释至所需工作浓度，如10 mM、50 mM、100 mM等）：

目标pH（25℃）	1M NaH₂PO₄（mL）	1M Na₂HPO₄（mL）
6.0	877	133
6.1	850	150
6.2	815	185
6.3	775	225
6.4	735	265
6.5	685	315
6.6	625	375
6.7	565	435
6.8	510	490
6.9	450	550
7.0	390	610
7.1	330	670
7.2	280	720

使用示例：欲配制100 mL 50 mM磷酸盐缓冲液（pH 7.0），取3.9 mL 1M NaH₂PO₄ + 6.1 mL 1M Na₂HPO₄，加水定容至100 mL即可。

四、配制与使用中的关键控制点

控制点	要求/措施	原因
形态确认	配制前必须确认试剂标签上的形态	无水/二水/十二水分子量不同，称量不可混用
风化问题	检查试剂是否结块或风化	长期存放可能失去结晶水，影响称量准确度
定容温度	在室温（20-25℃）下定容	高温定容冷却后体积收缩，浓度偏高
pH温度效应	在目标使用温度下校准pH	磷酸盐缓冲液pH随温度变化
灭菌方式	过滤除菌优先；高压灭菌后需复测pH	高温可能导致pH漂移
保存条件	室温密封保存	—

五、常见问题排查

异常现象	原因	解决方案
配制1M溶液时无法完全溶解	称量错误（误用十二水物按无水物称量）	确认试剂形态，按对应分子量重新称量
配制的PBS pH值与目标偏差大	两种贮液浓度不准或混合比例错误	检查贮液配制是否正确；按上表重新混合
灭菌后pH值变化	高温导致pH漂移	灭菌后冷却至室温，重新校准pH
溶液放置后出现沉淀	微生物污染或盐析出	重新配制；检查保存条件
细胞培养实验pH波动	缓冲液浓度不足或配制有误	确认工作浓度是否足够；重新配制

六、省心之选：跳过配制环节的不确定性

实拍.jpg

自行配制磷酸氢二钠溶液涉及三种水合物形态的区分识别、分子量换算、定容温度控制等多个环节——任何一个细节的疏忽都可能导致整批缓冲液报废。

杭州富沃克生物科技有限公司推出的1M磷酸氢二钠溶液，采用高纯度试剂原料精准配制，浓度准确、即开即用，省去自行配制的繁琐与批次波动风险。适用于磷酸盐缓冲液配制、细胞培养基、蛋白纯化等多种生物实验场景。

产品名称	规格	产品货号
1M磷酸氢二钠溶液（pH 7.2-7.4，0.2μm过滤）	50mL / 100mL / 250mL / 500mL / 1000mL	LSQ606-01—LSQ606-06
1M磷酸氢二钠溶液（细胞培养级）	500mL	—

邮箱：support@fwkbio.com
厂家联系微信号：19850855600
官网链接：磷酸氢二钠溶液-杭州富沃克生物科技有限公司

参考文献

[1] 磷酸氢二钠[EB/OL]. 百度百科, 2022-08-19.
[2] 磷酸一氢钠[EB/OL]. 维基百科.
[3] USP Monographs: Dibasic Sodium Phosphate[EB/OL]. USP. http://ftp.uspbpep.com/v29240/usp29nf24s0_m77027.html
[4] 索莱宝. pH9.0磷酸盐-生理盐水缓冲液（LA1790）产品说明[EB/OL].
[5] 磷酸缓冲液配置[EB/OL]. 江苏科伦多食品配料有限公司.

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目标pH（25℃）	1M NaH₂PO₄（mL）	1M Na₂HPO₄（mL）
6.0	877	133
6.1	850	150
6.2	815	185
6.3	775	225
6.4	735	265
6.5	685	315
6.6	625	375
6.7	565	435
6.8	510	490
6.9	450	550
7.0	390	610
7.1	330	670
7.2	280	720

目标pH（25℃）	1M NaH₂PO₄（mL）	1M Na₂HPO₄（mL）
6.0	877	133
6.1	850	150
6.2	815	185
6.3	775	225
6.4	735	265
6.5	685	315
6.6	625	375
6.7	565	435
6.8	510	490
6.9	450	550
7.0	390	610
7.1	330	670
7.2	280	720

目标pH（25℃）	1M NaH₂PO₄（mL）	1M Na₂HPO₄（mL）
6.0	877	133
6.1	850	150
6.2	815	185
6.3	775	225
6.4	735	265
6.5	685	315
6.6	625	375
6.7	565	435
6.8	510	490
6.9	450	550
7.0	390	610
7.1	330	670
7.2	280	720