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Technical article微生物实验中最基础也最常用的培养基，没有之一。大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌——大多数异养细菌都能在上面生长。它名字拗口，成分却朴实：牛肉膏提供维生素和辅酶因子，蛋白胨提供氨基酸，氯化钠调节渗透压，琼脂（固体版）充当“建筑骨架”。
本文将系统梳理牛肉膏蛋白胨培养基的核心成分与功能、液体（NB）与固体（NA）的区别、标准配制流程及关键操作细节。
牛肉膏蛋白胨培养基的名字来源于它的三大核心组分：
| 组分 | 来源 | 核心功能 | 通俗理解 |
|---|---|---|---|
| 牛肉膏 | 牛肉熬煮浓缩而成 | 提供水溶性维生素、碳水化合物、有机氮和矿物质 | “浓缩高汤块”——提供微量营养元素和能量 |
| 蛋白胨 | 蛋白质被酶或酸水解后的产物 | 提供各种氨基酸和短肽链 | “蛋白质供应站”——直接提供合成原料 |
| 氯化钠 | 化学试剂 | 调节渗透压，维持细胞内外水分平衡 | 创造“体液环境” |
| 琼脂（固体版） | 海藻提取多糖 | 40℃以下凝固，形成固体支撑 | “建筑骨架”——让细菌在表面长出单菌落 |
液体 vs 固体的关键区别：
液体培养基（NB） = 牛肉膏 + 蛋白胨 + 氯化钠 + 水 → 细菌自由游动，适合大量扩增
固体培养基（NA） = 上述成分 + 1.5%琼脂（即每升15g） → 细菌在表面“安家落户”，长出肉眼可见的菌落
| 组分 | 用量（液体NB） | 用量（固体NA） | 备注 |
|---|---|---|---|
| 牛肉膏 | 3 g | 3 g | — |
| 蛋白胨 | 10 g | 10 g | — |
| 氯化钠 | 5 g | 5 g | — |
| 琼脂 | — | 15 g | 仅固体培养基需要 |
| 蒸馏水 | 定容至1000 mL | 定容至1000 mL | — |
| 步骤 | 操作 | 关键说明 |
|---|---|---|
| ① 称料 | 称取10g蛋白胨 + 3g牛肉膏 + 5g氯化钠 + 15g琼脂（固体版） | — |
| ② 煮化 | 加入约800mL蒸馏水，加热搅拌至完全溶解 | 注意搅拌，防止糊底 |
| ③ 定容 | 补加蒸馏水定容至1L | — |
| ④ 调pH | 用1M NaOH或HCl调节pH至7.4 ± 0.2 | 灭菌后pH会下降约0.2，建议灭菌前调至7.6 |
| ⑤ 灭菌 | 121℃高压灭菌15分钟（保温保压时间） | — |
| ⑥ 倒平板（固体版） | 冷却至瓶壁温热（约55~60℃），靠近火焰操作，摇匀后倒平板 | 倒平板前用火焰快速灼烧瓶口和瓶盖内侧约2~3秒 |
| 要点 | 要求/措施 | 原因 |
|---|---|---|
| 保存条件 | 4℃冰箱保存 | — |
| 有效期 | 2周内用完 | 长了杂菌直接丢弃 |
| 平板冷凝水 | 倒完平板在超净台里吹干15分钟再收起来 | 否则涂布时水珠流动，菌落散成一片 |
| 倒平板气泡 | 倒的时候动作要慢，有气泡用酒精灯烧一下针尖戳破 | — |
| 菌落过密 | 稀释倍数不够 | 下次多稀释10倍再涂布 |
| 细菌 | 菌落特征 | 形象比喻 |
|---|---|---|
| 大肠杆菌 | 圆形、湿润、乳白色、边缘整齐 | 一颗颗小珍珠 |
| 枯草芽孢杆菌 | 干燥、褶皱、米黄色、边缘不齐 | 老奶奶脸上的皱纹 |
| 金黄色葡萄球菌 | 小而凸、有光泽、金黄色 | 撒了金粉的芝麻 |
在液体培养基（NB）中，不同细菌还呈现不同的生长模式：有的均匀混浊（如大肠杆菌），有的形成沉淀（如链球菌），有的表面长出菌膜（如枯草芽孢杆菌）——这些特征本身就是鉴别菌种的线索。
| 异常现象 | 可能原因 | 解决方案 |
|---|---|---|
| 琼脂提前凝固 | 倒平板前未摇匀或温度过低 | 倒平板前务必摇匀；控制温度在55~60℃ |
| 平板冷凝水过多 | 倒平板后未吹干 | 在超净台里吹干15分钟再收起来 |
| 倒平板时有气泡 | 倒的动作太快 | 动作要慢；气泡用针尖戳破 |
| 菌落长得密密麻麻 | 稀释倍数不够 | 下次多稀释10倍再涂布 |
| 培养基长杂菌 | 灭菌不彻底或保存过久 | 检查灭菌温度和时间；超过2周立即丢弃 |
自行配制牛肉膏蛋白胨培养基涉及称量、煮化（防糊底）、调pH（灭菌前需调高0.2）、高压灭菌、倒平板——步骤虽不复杂，但每个环节都可能影响培养基质量。
杭州富沃克生物科技有限公司推出即用型牛肉膏蛋白胨培养基，省去称量、煮化、调pH、灭菌的繁琐步骤，即开即用，实验重复性更有保障。适配广谱微生物培养与菌株扩增等科研实验。
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参考文献
[1] 沈萍, 陈向东. 微生物学实验（第5版）[M]. 北京: 高等教育出版社, 2018.
[2] 张武云, 殷辉, 周建波, 等. 枯草芽孢杆菌LF17生物学特性研究[J]. 中国农技推广, 2019, 35(1): 80-83+55.
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