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DNA分子量标准品（DNA Marker）选用指南

发布日期： 2026-07-23
浏览人气： 4

DNA分子量标准品（DNA Marker）选用指南

　　电泳结束后，打开凝胶成像仪——本该整齐排列的DNA条带却像蚯蚓爬过一样弯曲模糊，与旁边歪歪扭扭的Marker条带相映成趣。这种场景，在核酸电泳实验室里每天都在上演。其实问题往往出在那把“分子尺子”没选对或用错了。

　　本文为您系统梳理DNA Marker的核心知识，从原理到配方再到操作要点，帮助您避开常见陷阱。

01 什么是DNA Marker？

DNA Marker的本质是一组已知长度的DNA片段混合物，在琼脂糖凝胶电泳中充当分子量参照物。它就像一把带有精密刻度的标尺，每个“刻度”对应一个特定长度的DNA片段——100 bp、250 bp、500 bp、750 bp、1000 bp、2000 bp等，通过与未知样品条带的位置比对，即可推算其大致长度[7]。

目前主流的DNA Marker制备工艺包括三种[7]：

制备方式原理
载体酶切法用限制性内切酶切割已知序列的质粒或λDNA，获得一系列固定大小的片段
PCR扩增法设计多对特异性引物，通过PCR扩增出不同长度的目标片段
化学合成法直接人工合成特定长度的DNA寡核苷酸片段

02 配方解析：Marker里到底有什么？

综合多家品牌产品说明书，市售DNA Marker的配方虽然略有差异，但核心组分高度一致[1][2][3][4][5][6][8]：

组分功能常见浓度
Tris-HCl缓冲液维持体系pH稳定（范围7.6~8.0），保护DNA免受酸碱环境破坏10 mM[1][2][4]
EDTA螯合金属离子（如Mg²⁺、Ca²⁺），抑制核酸酶活性，防止DNA降解10 mM（部分产品为8 mM）[4][5]
甘油增加溶液密度，确保样品沉降于点样孔底部，避免漂浮散逸10%（部分产品5%~8%）[4][6]
示踪染料溴酚蓝、二甲苯青FF或橙黄G，用于指示电泳进程，决定何时终止电泳0.008%~0.033%[4][6]

各品牌差异说明：不同厂商的染料选择不尽相同——有的单用溴酚蓝，有的单用二甲苯青FF，有的两者并用，部分产品则使用橙黄G[6]；pH值在7.6~8.0之间浮动[1][2]。这些属于正常的配方差异化设计，不影响Marker的核心功能。

03 使用要点：三个关键参数

① 上样量
每孔推荐加样3~5 μL[4][5]，也可按每1 mm加样孔宽度加1 μL估算[1]。上样量不足会导致条带过淡，难以观察；上样过量则条带变宽变胖，影响大小判读。

② 琼脂糖凝胶浓度
凝胶浓度需根据目标片段大小灵活调整[8]：

  • 小片段（100~600 bp）：推荐2.0%~2.5%高浓度凝胶

  • 大片段（500~7000 bp）：推荐1.0%低浓度凝胶[7]

③ 电泳条件

  • 电压：4~10 V/cm（以凝胶长度厘米计）[2]

  • 时间：20~30分钟（对应5~7 cm凝胶长度）[2]
    电压过高会导致条带弯曲（“微笑效应”），电压过低则电泳时间过长。

重要提醒[1][2][4]：

  • Marker无需加热，直接化冻混匀即可上样

  • 定期更换电泳缓冲液——长期使用的缓冲液离子浓度下降、pH升高，缓冲能力减弱，条带必然模糊

  • -20°C长期保存，建议分装成单次用量，避免反复冻融

04 常见问题避坑

问题场景后果解决方案
电泳缓冲液过期或多次使用缓冲能力下降，条带跑得歪歪扭扭新鲜配制，及时更换
Marker反复冻融DNA降解，条带变淡甚至消失分装保存，-20°C存放[2]
上样量过大条带过曝变胖，无法准确比对大小[1]控制每孔3~5 μL
凝胶浓度与片段大小不匹配小片段用低浓度胶跑得太快，大片段用高浓度胶跑不动[7][8]根据片段范围选用合适浓度

05 即用型解决方案

如果配制过程繁琐或担心品质不稳定，杭州富沃克生物科技有限公司提供多款即用型DNA Marker成品，开盖即用，条带清晰锐利，亮度均衡[9][10]。

DNA Marker实拍.png

参考文献

[1] Yingxinbio. DL2000 DNA Marker产品说明.
[2] Qiyunbio. DL 2000 DNA marker产品说明.
[3] BioWORLD. DNA Marker (100bp-1kb) Product Information.
[4] Biomart. 100bp DNA Marker产品介绍. 2023.
[5] Biomart. DNA分子量标准Marker (100~5000 bp)产品介绍. 2025.
[6] Biomart. DNA Marker（50~1500bp）产品说明.
[7] 百度百科. DNA分子质量标准物.
[8] 生工. DNA分子量标准Marker B（100~600 bp）产品说明.
[9] 杭州富沃克生物科技有限公司. 三色预染DNA Marker产品介绍（DNA606）.
[10] 杭州富沃克生物科技有限公司. 高清晰低拖尾DNA Marker产品介绍.