异硫氰酸胍：RNA提取实验背后的“蛋白终结者”

做RNA实验的朋友，想必都经历过这样的绝望：小心翼翼提取了一下午的RNA，跑胶一看——降解得只剩一片模糊的弥散带。那一刻，恨不得把实验室的RNase都揪出来枪毙。

其实，早在你动手之前，有一样东西已经默默替你摆平了RNase这个头号敌人。它就是今天的主角——异硫氰酸胍。

一、一个让你不再害怕RNase的家伙

异硫氰酸胍（Guanidine thiocyanate，CAS: 593-84-0），分子式CH₅N₃·HSCN，分子量118.16，外观是白色结晶粉末。

它最厉害的本事，是既能撕碎细胞，又能秒杀RNase。在分子生物学实验室，它最重要的身份是RNA提取试剂的核心成分。你熟悉的TRIzol，主要成分之一就是它。

它的工作原理可以理解为：

1. 裂解：作为强离液剂，它像“蛋白溶解剂”一样，打断蛋白质的氢键，让细胞结构崩解，核蛋白与核酸分离

2. 保护：同时强力灭活RNase和DNase，防止RNA/DNA被降解

3. 分离：在酸性条件下配合苯酚-氯仿抽提，蛋白质被变性并沉淀于有机相与水相的界面，DNA在酸性条件下部分分配至有机相，而RNA主要保留在水相中，从而实现RNA的分离纯化

简单说就是——它先把细胞拆了，再顺手把想搞破坏的RNase干掉，最后让你干干净净地拿到RNA。

二、一张表看懂它

数据来源：ChemicalBook

三、4M异硫氰酸胍变性液怎么配？

最经典的配方是4M异硫氰酸胍变性液，常用于RNA提取。

配制方法：

在含484 mL 0.1% DEPC处理水、17.6 mL 0.75 mol/L柠檬酸钠（pH 7.0，用DEPC处理水配制）和26.4 mL 10% Sarkosyl（用DEPC处理水配制）的溶液中，加入250 g异硫氰酸胍，加热至60–65℃并持续搅拌至充分溶解。

工作液终浓度：

• 4 mol/L 异硫氰酸胍

• 25 mmol/L 柠檬酸钠（pH 7.0）

• 0.5%（w/v）N-十二烷基肌氨酸（Sarkosyl）

• 0.1 mol/L β-巯基乙醇（2-ME）

关键提醒：

• DEPC处理水是关键：配制RNA提取试剂需用0.1% DEPC处理水配制所有组分（包括柠檬酸钠和Sarkosyl溶液），所有塑料耗材需DEPC浸泡后高压灭菌

• β-巯基乙醇临用前加入：建议临用前加入工作液中（而非提前加入母液），添加后建议在1个月内用完，因为β-巯基乙醇易氧化失效

• 不用灭菌：异硫氰酸胍溶液本身不稳定，不需要高压灭菌

• 可以储存：变性液可在室温避光保存（不超过3个月），工作液含β-巯基乙醇后最好1个月内用完

• 注意安全：遇酸会释放有毒气体（如硫氰酸/异硫氰酸蒸气），需在通风橱中操作；具有腐蚀性，戴手套护目镜

• 防潮避光：粉末易吸潮，开封后需密封干燥避光保存

四、省心方案：直接买现成的

如果不想自己称量、助溶、调pH，市面上也有高品质的异硫氰酸胍粉末可选。比如杭州富沃克生物科技有限公司提供的异硫氰酸胍产品，纯度高、DNase/RNase活性检测合格，可直接用于RNA提取等敏感实验，省去自配纯化验证的麻烦。

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参考文献：

[1] ChemicalBook. 硫氰酸胍 593-84-0.
[2] Acmec Biochemical. 异硫氰酸胍合成注意事项. 2019.
[3] 西宝生物. 异硫氰酸胍产品说明.
[4] Sigma-Aldrich. 异硫氰酸胍安全数据表（SDS）. 2023.
[5] 酷来博. 异硫氰酸胍产品详情.
[6] 翌圣生物. 异硫氰酸胍产品说明.
[7] 丁香通. Northern杂交实验指导之一：RNA提取. 2015.
[8] cxbio.com. 异硫氰酸胍 - RNA提取试剂. 2024.
[9] 丁香通. 异硫氰酸胍常见的几个问题解答. 2020.