TB/Amp/X-Gal/IPTG (配制量：1L)

TB/Amp/X-Gal/IPTG (配制量：1L)

█组分

●配制

1. 配制磷酸盐缓冲液(0.17M KH₂PO₄和0.72M K₂HPO₄)100ml，溶解2.31gKH₂PO₄和12.54g K₂HPO₄于90ml的去离子水中，搅拌溶解后，加去离子水定容至100ml，高温高压灭菌。

2. 称取12g Tryptone、24g YeastExtract和4ml Glycerol，置于1L烧杯中。

3. 加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。

4. 加去离子水将培养基定容至1L后，加入15gAgar。

5. 高温高压灭菌后，冷却至60℃保存。

6. 加入100ml的上述灭菌磷酸缓冲液，1mlAmpicillin（100mg/ml）、1mlIPTG（24mg/ml）、2mlX-Gal（20mg/ml）后均匀混合。

7. 铺制平板（30～35ml培养基/90mm培养皿）。

8. 4℃避光保存。

▲注意

1. 5N NaOH具强腐蚀性，需戴手套、护目镜，逐滴慢加并搅拌，pH计校准后再测，微调至所需值。

2. 添加剂需在-20℃储存，X-Gal全程避光；仅在培养基冷却至60℃时添加，用无菌移液管，防交叉污染。

3. 铺板与储存：培养皿提前紫外线消毒30分钟以上，除尽气泡；平板凝固后倒置存放，严防冷凝水污染。