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Technical article采血后刚放到冰上就凝固了、RNA提取时降解得一塌糊涂、明明加了抗凝剂却跟没加一样——这些血液实验中最让人措手不及的状况，排查到最后往往发现：柠檬酸钠溶液本身就没配对。
柠檬酸钠溶液（枸橼酸钠溶液）是分子生物学中最常用的抗凝储备液之一——血液抗凝、RNA提取保护、缓冲试剂配制，处处都有它的身影。但很多人不知道的是，柠檬酸钠有无水物和二水合物两种形态，分子量相差36个单位——用错了形态，浓度直接报废。
本文将系统梳理柠檬酸钠溶液的核心用途、无水物与二水合物的区分、0.75M配制方法及抗凝使用要点。
柠檬酸钠（Sodium Citrate），又称枸橼酸钠，核心作用基于柠檬酸根离子与钙离子结合形成可溶性螯合物，从而阻断凝血级联反应。
主要应用场景：
血液抗凝：与血液按1:9（V:V） 比例混合，有效螯合Ca²⁺，防止凝血
RNA提取：在异硫氰酸胍法中作为变性液的缓冲组分，保护RNA完整性
缓冲试剂：与其他试剂配合维持体系pH稳定
柠檬酸钠有两种常见实验室形态，称量不可混用：
| 原料形态 | 化学式 | 分子量 | 配制0.75M（1 L）称量 |
|---|---|---|---|
| 无水柠檬酸钠 | Na₃C₆H₅O₇ | 258.07 | 193.55 g |
| 二水合柠檬酸钠 | Na₃C₆H₅O₇·2H₂O | 294.10 | 220.50 g |
| 项目 | 参数 |
|---|---|
| 目标浓度 | 0.75 mol/L |
| 溶质（二水合物） | Na₃C₆H₅O₇·2H₂O，分子量294.10 |
| 配制100 mL称量 | 22.05 g |
| 溶剂 | 去离子水（RNA实验建议DEPC处理水） |
| pH调节（可选） | 可调至pH 5.5或pH 7.0 |
| 保存条件 | 4℃保存，一年有效 |
| 步骤 | 操作 | 关键说明 |
|---|---|---|
| ① 确认形态与称量 | 检查试剂标签，确认是无水物（258.07）还是二水合物（294.10） | 二水合物称22.05 g（100 mL）/ 220.5 g（1 L） |
| ② 溶解 | 加入约80 mL去离子水，搅拌至完全溶解 | 溶液应清澈透明；RNA实验建议使用DEPC处理水 |
| ③ 定容 | 加去离子水定容至100 mL，充分混匀 | 建议在室温（20-25℃） 下定容 |
| ④ 调pH（可选） | 如需特定pH，逐滴加入1M HCl或NaOH，pH计监测至目标值 | 常用pH 5.5或pH 7.0 |
| ⑤ 过滤除菌（推荐） | 使用0.22 μm滤膜过滤除菌 | 不建议高压灭菌（高压可能导致水分蒸发和pH偏移） |
| ⑥ 分装与保存 | 分装至无菌离心管中，4℃保存 | 有效期一年；避免反复冻融和阳光直射 |
| 控制点 | 要求/措施 | 原因 |
|---|---|---|
| 原料形态确认 | 配制前必须确认是无水物（258.07）还是二水合物（294.10） | 两者分子量不同，称量不可混用 |
| 二水合物风化 | 检查试剂是否结块或风化 | 长期存放可能失去结晶水，影响称量准确度 |
| 灭菌方式 | 推荐0.22 μm滤膜过滤 | 高压灭菌可能导致浓度和pH偏移 |
| 抗凝比例 | 柠檬酸钠溶液:血液 = 1:9（V:V） | 确保有效螯合Ca²⁺，抗凝效果最佳 |
| 保存条件 | 4℃保存，避免反复冻融 | 反复冻融可能影响溶液稳定性 |
| 有效期 | 一年有效 | 长期存放可能因微生物污染而变质 |
| 异常现象 | 原因 | 解决方案 |
|---|---|---|
| 配制后溶液浑浊 | 原料不纯或已风化 | 确认原料形态，使用新鲜试剂重新配制 |
| 采血后仍凝固 | 抗凝剂比例不当或未混匀 | 确保1:9比例；采血后立即轻柔颠倒混匀 |
| RNA提取降解严重 | 溶液未用DEPC水配制或RNase污染 | RNA实验使用DEPC处理水；确保器具无RNase |
| 缓冲液pH不准 | pH校准温度不对或未用pH计 | 在目标使用温度下用pH计校准 |
| 溶液存放后出现沉淀 | 微生物污染 | 重新配制；注意无菌操作和保存条件 |
自行配制柠檬酸钠溶液涉及无水物与二水合物的形态区分（分子量差36）、精确称量、pH校准、无菌过滤——每一个环节的疏忽都可能影响实验结果的可靠性。
杭州富沃克生物科技有限公司推出的0.75M柠檬酸钠溶液（pH 7.0），采用高纯度柠檬酸钠原料精准配制，浓度准确、pH精确校准、无菌过滤，即开即用。适用于血液抗凝、RNA提取、缓冲试剂配制等多种分子生物学和细胞生物学实验场景。省去自行配制的繁琐与批次波动风险。
| 产品名称 | 规格 | 产品货号 |
|---|---|---|
| 0.75M柠檬酸钠溶液 | 100 mL / 500 mL / 1000 mL | NMS606-01—NMS606-30 |
邮箱：support@fwkbio.com
厂家联系微信号：19850855600
参考文献
[1] 0.75mol柠檬酸钠怎么配制[EB/OL]. 搜狗问问, 2015-12-07.
[2] 碧云天. 0.75M 柠檬酸钠, pH7.0（ST368）产品说明[EB/OL].
[3] 上海源叶生物科技有限公司. 柠檬酸钠缓冲液（0.75mol/L, pH5.5）（R27931）产品说明[EB/OL].
[4] 上海源叶生物科技有限公司. 柠檬酸钠缓冲液（0.75mol/L, pH7.0）（R29846）产品说明[EB/OL].
[5] 二水合柠檬酸钠[EB/OL]. 百度百科, 2025-09-11.
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