技术文章
Technical article别再让RNA污染你的DNA样品了：RNase A配制到使用的完整操作手册
质粒提取后跑胶，RNA条带明晃晃地出现在胶图上；DNA样品纯度检测时A260/A280比值异常——这些问题的根源，往往指向同一个方向：DNA样品中混入了RNA。
RNase A处理是去除RNA污染的标准方法。本文将系统梳理RNase A的核心功能、两种经典储备液配制方案、关键操作细节及实验注意事项。
RNase A（核糖核酸酶A）是一种内切核糖核酸酶，专门在RNA的嘧啶残基（C和U）位置“下刀”，把RNA切成小片段。
在质粒DNA或基因组DNA制备中，它的核心任务就是清除溶液中的RNA，不让它污染DNA样品。它像一把“专切RNA的剪刀”——锋利、稳定、不挑食。RNase A溶液的核心目标有两个：把RNase A溶解好，同时把DNase活性彻底干掉。
市面上最经典的配制方法有两种，核心区别在于溶解缓冲液和加热条件：
| 对比项 | 方案一（醋酸钠法） | 方案二（Tris-NaCl法） |
|---|---|---|
| RNase A粉末 | 100 mg | 100 mg |
| 溶解缓冲液 | 10 mM 醋酸钠（pH 5.2） | 10 mM Tris-HCl（pH 7.5）+ 15 mM NaCl |
| 终体积 | 10 mL | 10 mL |
| 终浓度 | 10 mg/mL | 10 mg/mL |
| 加热条件 | 100℃煮沸 15 min | 100℃煮沸 5-15 min |
| 冷却后调pH | 加1/10体积的1M Tris-HCl调至pH 7.4 | 一般无需额外调pH |
| 保存 | -20℃分装保存 | -20℃分装保存 |
两种方案各有优点。方案一是《分子克隆》中的经典方法，煮沸在酸性条件下进行，RNase不易沉淀；方案二操作更简洁，煮沸后直接使用。
RNase A粉末（100 mg）
10 mM 醋酸钠缓冲液（pH 5.2）
1M Tris-HCl（pH 7.4）
洁净离心管、移液器及无菌枪头
| 步骤 | 操作 | 关键说明 |
|---|---|---|
| ① 称量 | 精确称取 100 mg RNase A粉末 | 置于干净的离心管或烧杯中 |
| ② 溶解 | 加入 10 mL 10 mM 醋酸钠缓冲液（pH 5.2） | 轻轻吹打或搅拌至完全溶解，终浓度为10 mg/mL |
| ③ 煮沸 | 将溶液放入100℃沸水浴中加热 15分钟 | 此为灭活DNase的最关键保障 |
| ④ 缓慢冷却 | 取出后室温缓慢冷却 | 不要放冰上急冷——缓慢降温有助于RNase A维持正确构象 |
| ⑤ 调pH | 加入 1/10体积（即1 mL）的1M Tris-HCl（pH 7.4） | 将溶液pH调整至7.4左右，适合后续实验使用 |
| ⑥ 沉淀处理 | 如有可见沉淀，10000 rpm离心2分钟，取上清分装；或使用0.22 μm滤器过滤除菌 | — |
| ⑦ 分装保存 | 分装成小份（建议每管100-200 μL），-20℃冻存 | 避免反复冻融，可稳定保存2年以上 |
| 控制点 | 要求/措施 | 原因/说明 |
|---|---|---|
| DNase污染 | 使用洁净耗材和灭菌水 | 煮沸步骤是灭活DNase的最关键保障 |
| 煮沸pH条件 | 酸性（pH 5.2）条件下煮沸，冷却后再调至中性 | 中性pH下煮沸会导致RNase A沉淀 |
| 工作浓度 | 储备液10 mg/mL，使用时稀释至1~100 μg/mL | 质粒提取中往溶液I加RNase A至终浓度100 μg/mL左右（具体以试剂盒说明书为准） |
| 保存方式 | 小量分装（每管100-200 μL），-20℃恒定保存 | 每管只取一次用量，避免反复冻融 |
| 产品级别 | 普通级RNase A冻干粉适用本方法 | 分子生物学级（DNase free）或色谱纯化级产品请直接参照说明书溶解，无需煮沸 |
| 异常现象 | 可能原因 | 解决方案 |
|---|---|---|
| DNA样品中RNA残留明显 | RNase A用量不足或活性下降 | 增加工作浓度；检查储备液是否反复冻融 |
| 煮沸后溶液出现沉淀 | 中性pH下煮沸或冷却过快 | 确保在pH 5.2条件下煮沸；缓慢冷却 |
| 酶活性下降 | 反复冻融或保存不当 | 分装保存，避免反复冻融 |
| DNase残留污染DNA | 煮沸时间不足或温度不够 | 确保100℃煮沸至少15分钟 |
自行配制RNase A涉及称量、煮沸灭活DNase、缓慢冷却、调pH、分装等多个环节——每一个细节的疏忽都可能影响酶活性和DNA样品的纯度。更不用说处理过程中的RNase A粉末飞扬问题。
杭州富沃克生物科技有限公司推出的RNase A溶液，经过严格处理，不含DNase和蛋白酶，开盖即用，无需热处理。10 mg/mL的浓度直接对标经典配方，你只需要根据实验需求稀释至工作浓度即可。把配制的麻烦交给专业厂家，把时间留给真正重要的实验。
| 产品名称 | 规格 | 产品货号 |
|---|---|---|
| RNase A溶液 | 1 mL | FRN606-01 |
厂家联系微信号：19850855600
邮箱：support@fwkbio.com
参考文献
[1] Sambrook J, Fritsch EF, Maniatis T. Molecular cloning: a laboratory manual. 2nd ed. Cold Spring Harbor (NY): Cold Spring Harbor Laboratory Press; 1989.
[2] Sambrook J, Russell DW. Molecular Cloning: A Laboratory Manual. 3rd ed. Cold Spring Harbor Laboratory Press; 2001.
[3] Ribonuclease A from bovine pancreas (R4875) – Preparation Instructions. Sigma-Aldrich.
电话
微信扫一扫
地址：深圳市龙岗区平湖街道禾花社区华南大道一号华南国际皮革皮具原辅料物流区二期3A-053
邮箱：support@fwkbio.com
微信号：19850855600