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Technical article做酶学实验、抗氧化研究或者生化教学的朋友，对过氧化氢酶一定不陌生——气泡冒得最快的那个试管，就是它的“杰作”。
但很多人第一次用的时候都会困惑：2%到底怎么配？用什么缓冲液？配好了能放多久？
今天一篇讲清楚，配方、用途、保存避坑一次搞定。
过氧化氢酶（Catalase，CAS:9001-05-2）是一种催化效率极高的氧化还原酶，广泛存在于动植物细胞和微生物的过氧化物酶体中[1][5]。不同来源的过氧化氢酶比活性差异较大——以牛肝过氧化氢酶为例，其转换数（kcat）约为10⁶ s⁻¹量级[5]。
它干的事就一句话：把有毒的过氧化氢（H₂O₂）拆成水和氧气[1]。
2H2O2→Catalase2H2O+O2↑2H2O2Catalase2H2O+O2↑
试管里冒出的气泡，就是氧气[2]。
核心应用场景[1][4]：
1. 酶动力学研究与酶活力测定
2. 消除反应体系中残留的H₂O₂，避免对细胞或生物分子的氧化损伤
3. 抗氧化机制研究与活性氧相关实验
4. 生化教学实验（经典的“气泡实验”）
5. 过氧化氢分解实验与氧发生剂
2%过氧化氢酶溶液，指的是质量体积比（w/v）为2% ——也就是每100mL溶液含2g过氧化氢酶[3]。
注意：这和过氧化氢溶液的“2%”是两码事——一个是酶，一个是底物，千万别搞混。
市面上部分商品标注为2%(wt)，即质量分数，与w/v在稀溶液中数值接近[3]。
组分 | 用量 | 说明 |
过氧化氢酶（高纯） | 2 g | 不同批次比活性有差异，建议使用前确认活力单位[5] |
磷酸缓冲液（pH 7.0） | 定容至100 mL | 维持酶活性最适pH环境[1] |
超纯水 | 余量 | 电阻率≥18.2 MΩ·cm，避免金属离子等杂质影响 |
第一步：配制磷酸缓冲液（pH 7.0）[1][3]
配制50 mmol/L磷酸缓冲液，调pH至7.0
也可直接使用商品化PBS缓冲液（pH 7.0）
第二步：预溶解（防止结块的关键）
1. 取5-10mL磷酸缓冲液于小烧杯中
2. 将2g过氧化氢酶加入，用玻璃棒轻轻搅拌成糊状[4]
3. 避免使用磁力搅拌器——高速旋转产生的剪切力会导致酶变性
4. 确认无可见干粉后再逐步加入剩余缓冲液
第三步：定容与分装
1. 转移至容量瓶中，加磷酸缓冲液定容至100mL
2. 轻轻颠倒混匀（避免剧烈振荡产生气泡）
3. 按单次实验用量分装至EP管
4. 4℃冷藏保存，不可冷冻[5]
过氧化氢酶溶液的稳定性受多个因素影响：温度、pH、酶浓度、溶剂组成和微生物污染[5]。以下是关键控制点：
要点 | 具体要求 | 依据 |
保存温度 | 4℃冷藏，不可冷冻 | 冷冻会导致酶活性损失50-70%[5] |
分装使用 | 按单次用量分装，避免反复开盖 | 反复开盖引入污染和酶蛋白反复暴露于室温[4] |
自配溶液效期 | 建议24小时内用完 | 自配溶液不含稳定剂，微生物污染风险高[5] |
溶解温度 | 控制在4℃或冰上操作 | 室温下长时间溶解会加速酶活性下降[4] |
避免强氧化剂 | 不与高浓度H₂O₂（>5%）直接混用 | 高浓度底物会反向抑制酶活性[1] |
pH环境 | 最适pH 7.0，稳定范围 6.0-8.0 | 偏离此范围活性下降或失活[1][5] |
关于“商品化溶液为什么能长期保存”的说明：市售商品化过氧化氢酶溶液（如富沃克生物产品）经过特殊稳定化处理（含稳定剂配方、无菌过滤、惰性气体保护等工艺）[3][6]，可在4℃保存24个月不变质、活性不下降。自配溶液不含稳定剂，切忌参照商品化产品的保质期。
自己配过氧化氢酶溶液虽然不复杂，但酶的称量精度、溶解温度（需4℃冰上操作）、无菌操作、保存条件——每一步都可能影响酶活性。
如果追求省心省力，可以直接选择杭州富沃克生物科技有限公司的即用型2%过氧化氢酶溶液[6]：
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邮箱：support@fwkbio.com
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参考文献
[1] 过氧化氢酶活性测定（高锰酸钾滴定法）[EB/OL]. 生物谷（BioMart）, 2025.
[2] 过氧化氢酶溶液(C9H10O3)=2%(wt)[EB/OL]. ChemicalBook, 2026.
[3] 2%过氧化氢酶实验试剂产品说明[EB/OL]. 富沃克生物科技（深圳）有限公司, 2026.
[4] 2%过氧化氢酶溶液产品说明[EB/OL]. 杭州富沃克生物科技有限公司, 2026.
[5] 过氧化氢酶 来源于牛肝脏 aqueous solution 产品说明书[EB/OL]. Sigma-Aldrich.
[6] 过氧化氢酶溶液 2% 科研用产品说明[EB/OL]. 杭州富沃克生物科技有限公司, 2026.
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