脱氧核糖核酸酶I /DNA酶/ DNase I 试剂200 U 去除DNA RNase Free

脱氧核糖核酸酶 I（DNase I）
科研实验专用 · RNase-free · 高效去除DNA污染
适配RNA提取、足迹分析、染色质可及性研究等分子生物学实验

产品概述

DNase I（Deoxyribonuclease I，脱氧核糖核酸酶I）是一种高度保守的核酸内切酶，能够以内切方式水解单链或双链DNA，生成含有5'-磷酸基团和3'-羟基末端的寡核苷酸。该酶来源于牛胰腺，通过重组表达或天然提取工艺制备，具备严格的RNase-free质控标准。

DNase I的活性依赖于钙离子（Ca²⁺），并可被镁离子（Mg²⁺）或二价锰离子（Mn²⁺）激活。其作用机制是在DNA双链上随机切割磷酸二酯键，产生带有5'-磷酸末端的片段。本产品经过严格的质量控制，确保无RNase残留，适用于对RNA完整性要求极高的实验场景。

核心优势

一、RNase-free级别，保障RNA样本完整性

本产品经过严格纯化工艺处理，确保无RNase污染。在RNA提取和纯化过程中，可高效去除基因组DNA污染，同时不影响RNA的完整性和下游应用。每批次产品均经过RNase活性检测，确保不会对RNA样本造成降解。

二、酶活定义清晰，批次稳定性高

本产品以Kunitz单位进行活力标定。一个Kunitz单位的定义为：在25℃、pH 7.0条件下，催化高分子DNA溶液使260nm处吸光度每分钟增加0.001的酶量。每批次产品均经过严格的酶活检测，确保批次间性能一致。

三、多规格可选，适配不同实验需求

本产品提供多种规格与包装形式：

• 冻干粉形式：≥2,000 Kunitz units/mg protein

• 液体形式：1 U/μL或50 U/μL浓度

• 标准化小瓶：2,000 Kunitz units/瓶

四、适用范围广泛，覆盖多领域研究需求

DNase I是分子生物学研究中不可或缺的工具酶，广泛应用于以下实验场景：

核心应用场景

一、RNA提取中的DNA污染去除（核心应用）

几乎所有RNA样本中都含有痕量基因组DNA污染，DNase I处理是去除这些污染的最有效方法。本产品可用于：

• RNA提取过程中的柱上DNA消化：在RNA纯化柱上直接进行DNase I处理，高效清除基因组DNA残留

• RNA溶液的DNase I处理：将DNase I直接加入RNA溶液中，37℃孵育15-30分钟，随后通过EDTA螯合金属离子并加热灭活酶活性

• RT-PCR/qPCR前的模板DNA清除：确保逆转录和qPCR扩增的特异性，避免基因组DNA带来的假阳性信号

二、DNase I足迹法（DNase I Footprinting）

DNase I足迹法是研究DNA-蛋白质相互作用的经典方法。其原理是：当蛋白质与DNA特定序列结合时，会保护该区域的DNA免受DNase I切割，在电泳图谱上形成一段空白区域（“足迹”）。该方法操作简便，广泛应用于：

• 转录因子结合位点的鉴定与表征

• DNA结合药物的序列选择性研究

• 调控多态性的高通量检测

三、染色质可及性分析（DNase-seq）

DNase I与高通量测序技术结合，形成了DNase-seq技术，可在全基因组范围内精准检测染色质的开放区域。DNase I超敏位点（DHSs）是染色质开放状态的标志，该技术可以：

• 全基因组范围鉴定调控元件

• 构建基因调控网络

• 识别转录因子结合位点（通过单碱基分辨率的切割模式）

四、体外转录与翻译系统的优化

在体外转录（IVT）反应中，模板DNA的残留会干扰后续实验。本产品可用于：

• 体外转录后模板DNA的消化：在转录反应完成后，加入DNase I去除DNA模板，获得纯净的RNA产物

• 优化mRNA制备流程：在mRNA疫苗和药物研发中，DNase I处理是确保最终产物纯度的关键步骤

五、细胞凋亡检测

DNase I参与细胞凋亡过程中的DNA片段化，是研究细胞程序性死亡的重要工具酶。通过检测DNase I的活性变化，可评估细胞凋亡的发生与进程。

六、DNA损伤与修复研究

DNase I对DNA的随机切割特性使其成为研究DNA损伤与修复机制的重要工具。通过分析DNase I切割模式的变化，可评估DNA损伤程度和修复效率。

七、基因编辑与克隆

在基因编辑和分子克隆实验中，DNase I可用于：

• 缺口平移（Nick Translation） ：在DNA聚合酶存在下，DNase I引入的缺口可作为DNA合成的起始点

• DNA随机片段文库构建：通过控制DNase I的消化程度，生成随机DNA片段用于文库构建

• DNA标记与探针制备：DNase I处理可暴露DNA末端，便于后续标记反应

八、环境样本中DNA降解与病毒DNA检测

DNase I可用于环境样本中DNA的降解处理，以及在病毒DNA检测中去除背景DNA干扰，提高检测特异性。

产品参数

使用建议

一、RNA样本中DNA去除（推荐方案）

1. 反应体系：每10 μg RNA样品中加入2 units DNase I

2. 反应条件：37℃孵育15-30分钟

3. 终止反应：加入2.5 μL 25 mM EDTA，65℃加热10分钟灭活酶活性

二、DNase I足迹法

1. 制备末端标记的DNA片段

2. 与目标蛋白质（如转录因子、核提取物）孵育

3. 加入DNase I进行有限消化（控制酶量和时间）

4. 通过变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析切割模式

三、注意事项

• DNase I活性依赖于Ca²⁺和Mg²⁺的存在，反应缓冲液中需含有这两种金属离子

• EDTA可螯合金属离子从而抑制DNase I活性，是终止反应的有效方法

• 处理RNA样品时，务必使用RNase-free级别的DNase I，避免RNA降解

• 冻干粉形式的DNase I在使用前需用无菌水或合适缓冲液溶解

品质保障

• 每批次产品经过严格的酶活检测（Kunitz单位标定）

• 经过RNase活性检测，确保无RNase污染

• 批次间性能稳定，实验重复性高

• 适用于分子生物学、细胞生物学及生物化学研究

储存与运输

• 储存条件：-15℃至-30℃冷冻保存

• 运输条件：干冰或冰袋运输

• 有效期：详见产品标签

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