提供1L 20×SSPE浓缩缓冲液完整配制方案:175.3g NaCl、27.6g NaH2PO4·H2O、7.4g Na2EDTA·2H2O,调pH 7.4后高压灭菌。含磷酸盐保护核酸,EDTA螯合金属离子,是Southern/Northern印迹杂交的理想高盐母液
提供1L 20×SSC浓缩缓冲液完整配制方案:175.3g NaCl、88.2g二水柠檬酸钠,调pH 7.0后高压灭菌。含二水/无水柠檬酸钠换算及低温结晶复溶指南,是Southern/Northern印迹杂交的基础高盐母液。
提供100ml RNA杂交预杂交液完整配方(6×SSC、5×Denhardt‘s、0.5%SDS、50%甲酰胺、100μg/ml鲑鱼精DNA)。含精准体积混配及0.45μm过滤方案,强调RNase-free绝对防污染操作,适用于Northern blot中RNA的温和高效杂交。
标准DNA杂交封闭缓冲液,含高盐离子环境(6×SSC)提供核酸退火稳定性,5×Denhardt‘s溶液与大过量鲑鱼精DNA协同作用,高效封闭硝酸纤维素膜或尼龙膜上的非特异性蛋白与DNA结合位点,结合SDS去污剂显著降低杂交背景,是分子生物学经典膜杂交实验的必备核心试···
提供1L DNA杂交预杂交液完整配方(1.5M NaCl + 0.5M NaOH)。含精准称量步骤、安全防护指南及防CO2污染保质建议,适用于Southern/Northern印迹碱转移实验,确保核酸高效固定。
DNA变性缓冲液配制全攻略(1L):称取87.7g NaCl和20g NaOH,溶于800mL去离子水,定容至1L,室温保存。核心用途:Southern blot中转膜前的DNA碱变性处理,使双链DNA变为单链以便与探针杂交。关键提醒:NaOH具强腐蚀性,需戴手套护目镜;长期放置会吸收CO₂导致···
鲑鱼精DNA(Salmon DNA,10mg/mL)配制全攻略(约100mL):称取2g鲑鱼精DNA溶于200mL TE Buffer,室温搅拌2-4小时,加4mL 5M NaCl至终浓度0.1M,酚和酚/氯仿各抽提1次,乙醇沉淀后重溶于100mL去离子水,OD260定量后稀释至10mg/mL,煮沸10分钟分装,-20℃保存。···
溴乙锭溶液配制全攻略(100mL,10mg/mL):称取1g溴乙锭,加去离子水定容至100mL,搅拌至完全溶解,转移至棕色瓶室温避光保存。工作浓度为0.5μg/mL(即1:20000稀释)。核心用途:DNA琼脂糖凝胶电泳染色。关键提醒:溴乙锭是强致癌物,必须在通风橱中操作,佩···
10×Loading Buffer配制全攻略(10mL):200μL 0.5M EDTA(pH8.0)+ 25mg溴酚蓝 + 25mg二甲苯青FF + 5mL甘油,DEPC处理水定容至10mL,室温保存。核心用途:RNA甲醛变性琼脂糖凝胶电泳上样缓冲液,实时监控电泳进程。关键提醒:用于RNA电泳时,配制用水必须使···
6×Loading Buffer配制全攻略(500mL):称取4.4g EDTA、250mg溴酚蓝、250mg二甲苯青FF,加入180mL甘油,用2N NaOH调pH至7.0,定容至500mL。使用时按1:5比例与样品混合(1份Buffer + 5份样品)。关键提醒:甘油低温结晶属正常现象,37℃水浴复溶即可。核酸电泳···